应用惰性支持介质分离尿液蛋白质组分的最简单方法是尿蛋白电泳( urine protein electrophoresis，UPE)。电泳后经染色，显示尿液中的蛋白质组分，分离成许多清晰的蛋白条带(区带)，因此又叫区带电泳。支持介质分为两大类:第一类支持物，分离蛋白质分子根据分子的净电荷，这类支持物有滤纸、醋酸纤维膜和琼脂糖凝胶;第二类支持物，分离蛋白质分子根据分子电荷、分子形状和大小，这类支持物有淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶，其分辨率大大超过第一类支持物，但由于操作烦琐，不适宜临床常规使用，目前主要用于研究工作。

滤纸具有吸附效应使蛋白区带形成小的拖尾，且滤纸不易透明，不能用光密度计扫描，已经被淘汰;醋纤膜对蛋白质吸附小，区带清晰，分离时间短，能透明，可用光密度仪扫描，但重复性较差;琼脂糖电泳分辨率好，区带整齐，吸附小，尿液无需浓缩，在临床上广泛应用。全自动电泳仪系统是用计算机控制电泳、烘干、染色、漂洗，最后用光密度计自动扫描，打印出图形及定量报告。这类仪器所用电泳支持物多为琼脂糖，适用于标本量多的单位使用。

以非浓缩尿蛋白SDS-PAGE电泳为例介绍其原理:利用琼脂糖凝胶的选择性及多孔性，SDS与尿蛋白结合成一个带负电荷的蛋白质-SDS分子团，从而使尿液中的蛋白质完全依据相对分子质量大小予以分离。以尿蛋白成分最多的中分子量Alb (约70kD)为界限，可以区分出3个区域:从正极端起依次为低分子质量蛋白区(肾小管源性蛋白区)、中分子质量蛋白区( Alb区)、高分子质量蛋白区(肾小球源性蛋白区)。

1.电泳仪　选用晶体管整流的稳压稳流电源，电压0～600V，电流0～300mA。

2.电泳槽　选购适合琼脂糖凝胶的电泳槽，电极用铂金(白金)丝。

3.血清加样器　可用微量吸管( 10μl，分度0.5μl)或专用的电泳血清加样器。

4.光密度计　国产或进口的各种型号均可。

5.分光光度计。

琼脂糖浓度为50g/L;中性缓冲液pH 7.0±0.1;十二磺基硫酸钠( SDS)。

中性缓冲液( pH 7.0±0.3; SDS 1.0g/L)。

2g/L结晶紫; 10%醋酸。

含柠檬酸5g/L。

中性缓冲液pH 7.0±0.3; SDS;溴酚蓝。

将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其在同一水平面。

用洁净滤纸吸取凝胶孔内多余的缓冲液。

20μl稀释液与80μl尿液混匀，然后用微量吸样管加5μl于加样孔，室温下静置10分钟。反转琼脂糖凝胶置于电泳槽，凝胶两端与缓冲液连通。

接通电源，注意加样孔一端在负极，切勿接错。电压240V、电流41.7mA、功率10W(不同电泳仪所需电压、电流可能不同，夏季、冬季通电时间有所差异，一般为1小时，应视待电泳区带展开情况灵活掌握)。

通电完毕，取下凝胶烘干( 80℃，35分钟)，直接浸于结晶紫染色液中，染色30分钟，然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。

将已透明的薄膜放入全自动光密度计内，进行扫描分析。

全自动光密度扫描仪扫描分析得出结果。

成人尿蛋白阴性或＜150mg/24h尿时，尿蛋白电泳参考区间:

蛋白质组分　　占总蛋白百分比%

低分子量蛋白　0

中分子量蛋白( Alb)　100

高分子量蛋白　0

以上参考区间引自试剂说明书，各实验室应该建立各自的参考区间。

试剂要求:每次使用凝胶的数量可能不等，所以缓冲液经10次使用后，应将缓冲液弃去。电泳槽两侧的液面应保持同一水平，否则将会影响蛋白分子的泳动速度。电泳失败的原因如下:

点样不均匀、温度过高致使凝胶水分蒸发、缓冲液变质;电泳时凝胶放置不正确，使电流方向不平行。

点样过多、电流过低导电差等。

由于染色时间不足或染色液陈旧所致。

温度未达80℃以上或烘干时间未达35分钟所致。

尿蛋白电泳通常可分离出低分子量蛋白区(β ₂-微球蛋白、溶菌酶、视黄醇结合蛋白、游离轻链、α ₁-微球蛋白、游离轻链二聚体)、中分子量蛋白区( Alb)、高分子量蛋白区(转铁蛋白、IgG、IgA、触珠蛋白、α ₂-巨球蛋白) 3个区域。正常人尿液中蛋白阴性或仅出现少量Alb;中、高分子量蛋白区主要反映肾小球病变;低分子量蛋白区可见于肾小管病变及溢出性蛋白尿;高、中、低分子量蛋白区同时出现，可见于肾小管及肾小球均被累及的病变。