表(观)遗传学词典
上QQ阅读APP看书,第一时间看更新

chromosome conformation capture(3C) 染色体构象捕获技术

染色体构象捕获技术最初用于酵母中研究基因表达时染色质的空间构象,现多用于研究细胞内染色质间的相互作用,且适用于研究5kb至数百kb染色质之间的相互作用。此技术假定物理上互相作用的DNA片段连接频率最高,用基因组特异性PCR来检测基因组中DNA片段之间的物理接触,最终以PCR产物的丰度来确定是否存在相互作用。若染色质间确实存在与蛋白质因子相互作用的片段,那么它们之间的酶连效率应比未发生定向作用的酶连片段高很多,因此,可以使用定量PCR的方法,对感兴趣的位点进行定量分析,找出活细胞中潜在的相互作用的染色质片段。该技术的关键步骤是福尔马林即刻固定活细胞内的染色质结构,酶切时需要较高的酶切效率,连接酶连接时应保证较低的基因组浓度和较高的连接酶浓度,尽量减少非特异性的酶连。缺陷是以此技术检测到染色质间的相互作用并不能完全说明这些染色质接触具有功能意义,用此技术未检测到的染色质间的相互作用也未能排除真实状况下存在相互作用的可能性。